Единица Бетезда: метод измерения ингибиторов¶

Единица Бетезда — это международная стандартизированная мера активности ингибиторов фактора VIII (антигемофильного глобулина А) в плазме крови человека, используемая в лабораторной диагностике гемофилии А и для контроля эффективности заместительной терапии. Единица названа в честь Национальных институтов здравоохранения США (NIH), расположенных в городе Бетесда (штат Мэриленд), где в 1970-х годах был разработан и валидирован данный метод количественной оценки ингибиторов.

¶Определение и принцип метода

Одна единица Бетезда (Bethesda unit, BU) определяется как количество антител, которое нейтрализует 50 % активности фактора VIII в нормальной плазме после инкубации в течение 2 часов при температуре 37 °C. Метод основан на классическом коагулологическом тесте — определении активированного частичного тромбопластинового времени (АЧТВ) или одностадийном хромогенном анализе фактора VIII.

Принцип измерения заключается в смешивании исследуемой плазмы пациента (содержащей предположительно ингибитор) с нормальной пулированной плазмой в различных разведениях. Смесь инкубируется, после чего измеряется остаточная активность фактора VIII. Построение графика зависимости остаточной активности от разведения позволяет рассчитать титр ингибитора в единицах Бетезда.

¶История разработки

Метод был предложен в 1975 году группой исследователей под руководством Каспера и соавторов на базе NIH. Необходимость создания стандартизированного теста возникла из-за высокой вариабельности результатов между различными лабораториями при использовании собственных протоколов. Введение единицы Бетезда позволило унифицировать оценку ингибиторов, что критически важно для мониторинга пациентов с гемофилией, получающих заместительную терапию концентратами фактора VIII.

¶Модификации метода

¶Nijmegen-модификация

В 1995 году была предложена модификация Nijmegen (по названию голландского города Неймеген), которая повысила специфичность теста. Отличия включают:

• буферизацию нормальной плазмы (HEPES-буфер) для стабилизации pH;
• использование иммунодефицитной плазмы (с дефицитом фактора VIII) в качестве разбавителя вместо физиологического раствора;
• контрольную смесь с буфером вместо нормальной плазмы.

Данная модификация снижает количество ложноположительных результатов, особенно при низких титрах ингибиторов, и в настоящее время рекомендуется Международным обществом по тромбозу и гемостазу (ISTH).

¶Клиническое значение

Определение титра ингибитора в единицах Бетезда является обязательным компонентом ведения пациентов с гемофилией А. Различают:

• Низкий титр — менее 5 BU/мл. У таких пациентов возможно увеличение дозы фактора VIII для преодоления ингибитора.
• Высокий титр — более 5 BU/мл. Требуется применение шунтирующих препаратов (активированный протромбиновый комплекс, рекомбинантный фактор VIIa) или индукция иммунной толерантности.

Единица Бетезда также используется для мониторинга эффективности иммунотолерантной терапии (ИТТ), при которой ежедневно вводят высокие дозы фактора VIII для эрадикации ингибитора. Снижение титра ниже 0,6 BU/мл считается критерием частичного успеха ИТТ.

¶Лабораторные особенности

Для корректного определения единиц Бетезда необходимо соблюдение ряда условий:

• использование свежеприготовленной пулированной нормальной плазмы от не менее 20 доноров;
• строгий контроль времени инкубации (120 ± 5 минут);
• калибровка на международный стандартный образец (Международная единица ингибитора, установленная ВОЗ);
• проведение теста на анализаторах, валидированных для коагулологических исследований.

Ингибиторы фактора VIII представляют собой преимущественно поликлональные антитела класса IgG (подклассы IgG1 и IgG4), которые инактивируют фактор VIII как в плазме, так и в концентратах. Единица Бетезда не применима для оценки ингибиторов фактора IX (гемофилия B), для которых используется аналогичный, но отдельно стандартизированный метод.

¶Ограничения метода

Метод Бетезда имеет ряд ограничений. Тест может давать ложноположительные результаты при наличии волчаночного антикоагулянта, гепариновой контаминации образца или выраженной коагулопатии. В таких случаях рекомендуется использование хромогенного варианта теста, который менее чувствителен к данным интерференциям. Кроме того, единица Бетезда отражает лишь функциональную активность ингибитора, но не его иммунологическую концентрацию, что требует дополнительных исследований (ELISA) для полной характеристики антител.

¶Заключение

Единица Бетезда остается стандартным инструментом в гематологии и трансфузиологии, обеспечивая воспроизводимую количественную оценку ингибиторов фактора VIII. Несмотря на появление альтернативных методов, включая флуоресцентные иммуноанализы и титрование с помощью хромогенных субстратов, единица Бетезда сохраняет позиции обязательного теста в клинических рекомендациях по лечению гемофилии.

¶Источники

• Kasper C.K. et al. A more uniform measurement of factor VIII inhibitors // Thrombosis et Diathesis Haemorrhagica, 1975.
• Verbruggen B. et al. The Nijmegen modification of the Bethesda assay for factor VIII inhibitors // Thrombosis and Haemostasis, 1995.
• Клинические рекомендации по диагностике и лечению гемофилии (Национальное гематологическое общество, 2021).
• Blanchette V.S. et al. Definitions in hemophilia // Journal of Thrombosis and Haemostasis, 2014.