Иммуногистохимическое исследование в медицине¶

Иммуногистохимическое исследование (ИГХ) — метод лабораторной диагностики, основанный на выявлении в тканях и клетках特定ных белков (антигенов) с помощью антител, меченных визуализируемыми маркерами. Относится к области патоморфологии и молекулярной биологии; применяется преимущественно в онкологии, а также в патологической анатомии, гематологии и научных исследованиях. Метод позволяет определить тканевую принадлежность клеток, их происхождение, степень дифференцировки и экспрессию диагностически значимых молекул, что делает его ключевым инструментом морфологической верификации опухолей.

¶История

Основы метода заложены в 1941 году, когда американские исследователи Альберт Кунс и его коллеги применили флуоресцентно меченые антитела для обнаружения антигенов в срезах тканей. Эта работа положила начало иммунофлуоресцентному анализу. В 1960–1970-е годы развитие ферментных меток (пероксидаза хрена, щелочная фосфатаза) позволило перейти от флуоресцентной микроскопии к световой и повысить стабильность препаратов. В 1974 году предложена пероксидазно-антипероксидазная система, повысившая чувствительность. В 1980–1990-е годы внедрены методы усиления сигнала (авидин-биотиновая система, полимерные технологии), а также способы «демаскировки» антигенов — термическая и ферментативная обработка срезов, необходимые для выявления белков, зафиксированных формалином.

В России иммуногистохимия начала активно развиваться в 1990-е годы; в настоящее время методика используется в крупных онкологических центрах, патологоанатомических отделениях и референс-лабораториях.

¶Принцип метода

Метод основан на реакции «антиген — антитело». Последовательность этапов:

1. Получение срезов ткани (обычно парафиновых, толщиной 3–5 мкм) или цитологических препаратов.
2. Демаскировка антигенов — восстановление их структуры после фиксации формалином.
3. Нанесение первичных антител, специфичных к искомому белку.
4. Нанесение вторичных антител, связанных с ферментом или полимером.
5. Добавление хромогена (например, диаминобензидина), который под действием фермента образует окрашенный осадок в местах локализации антигена.
6. Докрашивание ядер (гематоксилином) и микроскопическая оценка.

Результат оценивается по наличию и интенсивности окрашивания, а также по доле окрашенных клеток. Для ряда маркеров применяется полуколичественная шкала (например, оценка экспрессии HER2/neu по шкале от 0 до 3+).

¶Виды и варианты

• Прямой метод — антитела, меченные маркером, наносятся непосредственно на срез; применяется редко из-за низкой чувствительности.
• Непрямой метод — используется вторичная система усиления сигнала; наиболее распространён.
• Иммунофлуоресценция — маркер флуоресцентный; применяется в нефропатологии, дерматологии и научных работах.
• Двойное и множественное окрашивание — одновременное выявление нескольких антигенов на одном срезе.
• ИГХ на цитологических препаратах — исследование клеточного материала, в том числе полученного при тонкоигольной аспирационной биопсии.

¶Применение

¶Онкология

Основная сфера применения. ИГХ позволяет:

• верифицировать гистогенез опухоли (эпителиальная, мезенхимальная, лимфоидная);
• определить первичный очаг при метастазах неясного происхождения;
• оценить прогностические и предиктивные маркеры: рецепторы эстрогена и прогестерона, HER2/neu, Ki-67, PD-L1 и другие;
• выбрать таргетную терапию.

¶Гематология

Иммуногистохимия и родственный метод проточной цитометрии применяются для дифференциальной диагностики лимфом и лейкозов, определения линейности и клональности клеток.

¶Другие области

Метод используется в нефропатологии (диагностика гломерулонефритов), при трансплантации (выявление отторжения), в инфекционной патологии (обнаружение возбудителей в тканях), в нейробиологии и эмбриологии.

¶Маркеры

Наиболее часто применяемые группы маркеров:

¶Ограничения и критика

К ограничениям метода относят:

• зависимость результата от качества фиксации и обработки ткани;
• вариабельность результатов между лабораториями при отсутствии стандартизации;
• субъективность визуальной оценки;
• возможность ложноположительных и ложноотрицательных результатов;
• потребность в дорогостоящих реактивах и квалифицированном персонале.

Для повышения воспроизводимости применяются внешние и внутренние контроли, стандартизированные протоколы и автоматизированные системы окрашивания.

¶Значение

Иммуногистохимическое исследование занимает центральное место в современной морфологической диагностике, обеспечивая переход от описательной патоморфологии к молекулярно-ориентированной. Оно служит основой для назначения таргетной и иммунотерапии, а также для определения прогноза заболевания. В сочетании с молекулярно-генетическими методами (FISH, ПЦР, секвенирование) ИГХ формирует комплексный диагностический подход в онкологии.

Источники: руководства по патологической анатомии, материалы Всемирной организации здравоохранения по классификации опухолей, публикации в рецензируемых медицинских журналах.