РПГА — реакция пассивной гемагглютинации¶
РПГА (реакция пассивной гемагглютинации) — серологический лабораторный метод, основанный на способности антител к агглютинации (склеиванию) эритроцитов, покрытых антигеном. Метод относится к классу реакций агглютинации и широко применяется в клинической лабораторной диагностике для выявления специфических антител к возбудителям инфекционных заболеваний, а также для определения групп крови и резус-фактора.
¶Принцип метода
В основе РПГА лежит взаимодействие антител с антигеном, адсорбированным на поверхности инертных носителей — чаще всего на формалинизированных эритроцитах животных (овец, кур, кроликов). При наличии в сыворотке пациента специфических антител происходит их связывание с антигеном на эритроцитах и образование видимой агглютинации — хлопьевидного осадка в лунках планшета. Отсутствие агглютинации указывает на отсутствие соответствующих антител в исследуемом материале.
В отличие от прямой РПГА, в которой антиген адсорбирован на эритроциты, в непрямой РПГА (реакции пассивной гемагглютинации с ингибированием) на эритроциты адсорбирован антиген, а в сыворотке определяют не антитела, а сами антигены — например, антигены вирусов гепатита B.
¶История
Метод был предложен в 1941 году советским учёным А. С. Гамбургом и А. Я. Кульбергом. Изначально РПГА разрабатывалась как метод диагностики бруцеллёза и сифилиса. В 1940-е годы метод получил широкое распространение в СССР благодаря его относительной простоте, высокой чувствительности и возможности стандартизации. В дальнейшем РПГА была адаптирована для диагностики других инфекций — токсоплазмоза, хламидиоза, вирусных гепатитов, ВИЧ-инфекции, а также для определения групп крови и резус-фактора.
¶Методика проведения
Исследование проводят в планшетах с лунками (чаще 96 лунок). Порядок выполнения:
- В лунки планшета вносят разведённую сыворотку пациента (обычно серию последовательных разведений).
- Добавляют стандартную суспензию эритроцитов с адсорбированным антигеном.
- Планшет инкубируют при комнатной температуре в течение 1,5–2 часов (или при 37 °C — 1 час).
- Результат оценивают визуально по наличию или отсутствию агглютинации.
Результат выражают в титре — наибольшем разведении сыворотки, при котором наблюдается агглютинация. Положительным считают титр 1:160 и выше (для большинства инфекций), хотя конкретные пороговые значения зависят от стандартизации тест-системы.
¶Показания к применению
| Область | Что определяют |
|---|---|
| Диагностика инфекций | Антитела к токсоплазме, хламидиям, бруцеллам, вирусу гепатита B, ВИЧ |
| Группы крови | Антигены системы AB0 и Rh-фактор |
| Сифилис | Антитела к Treponema pallidum (реакция Вассермана-Гебридеса и др.) |
| Скрининг доноров | Комплексная оценка пригодности донорской крови |
¶Достоинства и ограничения
К достоинствам метода относят:
- высокую чувствительность (до 95–98 %);
- простоту и доступность оборудования;
- возможность стандартизации и автоматизации;
- относительно низкую стоимость исследования.
К ограничениям:
- необходимость визуальной оценки результата (субъективность);
- возможные перекрёстные реакции при наличии неспецифических антител;
- риск ложноположительных результатов при гипергаммаглобулинемии, беременности, аутоиммунных заболеваниях.
¶РПГА в современной лабораторной практике
Несмотря на появление более современных методов — иммуноферментного анализа (ИФА), полимеразной цепной реакции (ПЦР), хемилюминесцентного иммуноанализа — РПГА продолжает использоваться в ряде лабораторий, особенно в развивающихся странах и в регионах с ограниченным доступом к высокотехнологичному оборудованию. В России РПГА остаётся одним из стандартных методов в перечне обязательных исследований при донорском скрининге и в ряде инфекционных диагностик.
В клинической практике РПГА чаще всего применяется как скрининговый метод, а при положительном результате — как подтверждение с помощью более специфичных тестов (ИФА, ПЦР).
Источники:
- Гамбург А. С., Кульберг А. Я. «Реакция пассивной гемагглютинации» — М.: Медицина, 1968.
- Лабораторная диагностика инфекционных болезней / под ред. В. И. Покровского. — М.: ГЭОТАР-Медиа.
- Клиническая лабораторная диагностика: национальное руководство / под ред. А. И. Карпова, А. А. Кубанова. — М.: ГЭОТАР-Медиа, 2019.
- Справочник по лабораторным методам исследования / под ред. Н. А. Клобуковой. — СПб.: СпецЛит.