Brucella melitensis

Brucella melitensis — это грамотрицательная коккобацилла, факультативный внутриклеточный паразит, возбудитель бруцеллёза у мелкого рогатого скота (овец и коз) и один из основных этиологических агентов бруцеллёза человека. Относится к роду Brucella, семейству Brucellaceae. Является наиболее патогенным и вирулентным видом для человека среди всех бруцелл, вызывая тяжёлые формы заболевания с высокой вероятностью хронизации и инвалидизации.

Таксономия и история открытия

Вид Brucella melitensis был впервые выделен в 1887 году британским военным врачом Дэвидом Брюсом на острове Мальта из селезёнки умершего солдата. Первоначально микроорганизм был назван Micrococcus melitensis (от лат. melitensis — «мальтийский»). В 1920 году американский бактериолог Элис Эванс на основании морфологического и культурального сходства предложила объединить возбудителей бруцеллёза крупного рогатого скота (Brucella abortus) и мальтийской лихорадки в один род, который был назван в честь первооткрывателя — Brucella. Таким образом, Micrococcus melitensis был переименован в Brucella melitensis.

Долгое время бруцеллёз, вызываемый B. melitensis, был известен как «мальтийская лихорадка» или «средиземноморская лихорадка». Эпидемиологические исследования, проведённые на Мальте в начале XX века, установили связь заболевания с употреблением сырого козьего молока, что привело к запрету на его потребление британским гарнизоном и резкому снижению заболеваемости.

Морфология и биологические свойства

Brucella melitensis представляет собой мелкие (0,5–0,7 × 0,6–1,5 мкм) неподвижные коккобациллы, не образующие спор. Капсула не выражена, но некоторые штаммы могут образовывать микрокапсулу. Грамотрицательна, окрашивается по методу Козловского в красный цвет (другие бактерии — в зелёный).

Культуральные свойства

• Облигатный аэроб (в отличие от B. abortus, для роста которой требуется 5–10 % CO₂).
• Оптимальная температура роста — 36–37 °C, pH — 6,8–7,2.
• На плотных питательных средах (кровяной агар, триптозо-соевый агар) через 2–4 суток образует мелкие (0,5–1 мм), круглые, выпуклые, гладкие (S-форма), прозрачные колонии с голубоватым оттенком. При диссоциации образуются шероховатые (R-формы) колонии, менее вирулентные.
• В жидких средах даёт равномерное помутнение без плёнки.

Биохимические свойства

• Обладает уреазной активностью (расщепляет мочевину).
• Окисляет глюкозу, ксилозу, рибозу, галактозу, арабинозу.
• Не ферментирует лактозу, сахарозу, мальтозу.
• Образует сероводород (H₂S) в меньших количествах, чем B. abortus.
• Не восстанавливает нитраты до нитритов (важный дифференциальный признак).

Антигенная структура

Содержит два основных поверхностных антигена — А (абортус) и М (мелитензис). У B. melitensis преобладает М-антиген (в соотношении 1:20 по сравнению с А-антигеном), что отличает её от B. abortus (преобладает А-антиген). Липополисахарид (ЛПС) клеточной стенки является основным фактором вирулентности и иммуногенности.

Патогенность и факторы вирулентности

Brucella melitensis является облигатным внутриклеточным паразитом, способным выживать и размножаться в фагоцитах макроорганизма. Основные факторы вирулентности включают:

• Липополисахарид (ЛПС): ингибирует фагосомно-лизосомальное слияние, подавляет апоптоз макрофагов, защищает бактерию от действия комплемента и антител.
• Бруцеллобактин: сидерофор, обеспечивающий захват ионов железа из среды хозяина.
• Белки теплового шока (GroEL, DnaK): способствуют выживанию в стрессовых условиях внутриклеточной среды.
• Тип IV секреторной системы (VirB): необходим для транспорта эффекторных белков в цитоплазму клетки-хозяина и формирования репликационной ниши (бруцеллосомы).
• Циклический β-1,2-глюкан: участвует в осморегуляции и взаимодействии с мембранами клеток хозяина.

У человека B. melitensis вызывает наиболее тяжёлые формы бруцеллёза. Инфицирующая доза может составлять всего 10–100 бактериальных клеток. Инкубационный период варьирует от 1 до 8 недель.

Эпидемиология

Основным резервуаром Brucella melitensis являются овцы и козы. Заражение человека происходит:

• Алиментарным путём — при употреблении сырого молока, молочных продуктов (брынза, сыр, кумыс), недостаточно термически обработанного мяса.
• Контактным путём — через повреждённую кожу и слизистые оболочки при уходе за больными животными, при стрижке шерсти, приёме родов, разделке туш.
• Аэрогенным путём — при вдыхании пыли, контаминированной бактериями (в овчарнях, лабораториях).

Заболевание распространено в странах Средиземноморья, Ближнего Востока, Центральной Азии, Африки и Латинской Америки. В России эндемичными регионами являются республики Северного Кавказа (Дагестан, Чечня, Ингушетия, Карачаево-Черкесия), Калмыкия, Астраханская и Ростовская области. По данным Роспотребнадзора, ежегодно в РФ регистрируется от 300 до 500 случаев бруцеллёза, из которых до 60–70 % вызваны B. melitensis.

Профессиональные группы риска: ветеринары, животноводы, работники мясокомбинатов, сотрудники микробиологических лабораторий.

Клиническая картина бруцеллёза, вызываемого B. melitensis

Заболевание характеризуется полиморфизмом симптомов и склонностью к хроническому течению. Выделяют следующие клинические формы:

Острый бруцеллёз (до 3 месяцев)

• Внезапное начало с высокой лихорадкой (до 40 °C), ознобами, проливными потами.
• Волнообразная лихорадка (тип «ундулирующая»), характерная для B. melitensis.
• Выраженная интоксикация: слабость, головная боль, миалгии, артралгии.
• Увеличение лимфатических узлов (шейных, подмышечных), гепатоспленомегалия.

Подострый бруцеллёз (3–6 месяцев)

• Рецидивирующая лихорадка с периодами апирексии.
• Развитие очаговых поражений: артриты (чаще коленных, тазобедренных, крестцово-подвздошных суставов), бурситы, тендовагиниты.
• Орхиты, эпидидимиты у мужчин; сальпингиты, оофориты у женщин.
• Радикулиты, невриты, плекситы.

Хронический бруцеллёз (более 6 месяцев)

• Субфебрилитет, астенический синдром.
• Деформирующие остеоартрозы, спондилиты (чаще поясничного отдела), сакроилеиты.
• Фиброзиты, целлюлиты (воспаление подкожной клетчатки).
• Поражение нервной системы: менингиты, энцефалиты, миелиты, полиневриты.
• Реактивные психозы, депрессии.

Резидуальный бруцеллёз (после перенесённого)

• Стойкие остаточные изменения: фиброзные анкилозы суставов, деформации позвоночника, мышечные атрофии, стойкая вегетативная дисфункция.

Осложнения: бруцеллёзный эндокардит (редко, но летальность до 80 %), абсцессы печени и селезёнки, менингоэнцефалит, септический шок.

Лабораторная диагностика

Диагноз устанавливается на основании клинико-эпидемиологических данных и подтверждается лабораторными методами.

Бактериологический метод

• Посев крови (гемокультура) — наиболее информативен в остром периоде. Кровь засевают на двухфазную среду Кастаньеды или на специальные бруцеллёзные среды. Рост отмечается через 3–10 суток.
• Посев костного мозга, ликвора, пунктатов лимфоузлов, синовиальной жидкости.
• Идентификация проводится по морфологическим, культуральным, биохимическим свойствам и с помощью агглютинации с моноспецифическими сыворотками.

Серологические методы

• Реакция агглютинации Райта (РА): положительна при титрах 1:200 и выше.
• Реакция Хеддльсона (пластинчатая РА): используется для скрининга.
• Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА).
• Иммуноферментный анализ (ИФА): позволяет определять IgM (острый процесс) и IgG (хронический процесс).
• Полимеразная цепная реакция (ПЦР): высокоспецифичный и чувствительный метод, позволяет выявить ДНК возбудителя в крови, ликворе, тканях.

Аллергическая проба Бюрне

• Внутрикожное введение бруцеллина (аллергена). Учитывается через 24–48 часов. Положительна у переболевших и вакцинированных. В настоящее время используется ограниченно.

Лечение

Лечение бруцеллёза, вызванного B. melitensis, должно быть комплексным и длительным (не менее 6 недель). Из-за внутриклеточной локализации возбудителя требуется комбинация антибиотиков.

Этиотропная терапия

• Препараты выбора: доксициклин (по 100 мг 2 раза в сутки) в комбинации со стрептомицином (1 г внутримышечно 1 раз в сутки) или гентамицином (5 мг/кг в сутки).
• Альтернативные схемы: доксициклин + рифампицин (600–900 мг/сут); офлоксацин (400 мг 2 раза в сутки) + рифампицин.
• У детей и беременных: триметоприм/сульфаметоксазол (ко-тримоксазол) в сочетании с рифампицином.
• Длительность курса: 6–8 недель. При хронических формах — повторные курсы с интервалом 2–3 недели.

Патогенетическая терапия

• Дезинтоксикация (инфузионные растворы).
• Нестероидные противовоспалительные препараты (диклофенак, ибупрофен).
• Глюкокортикостероиды (при поражении нервной системы, тяжёлых артритах).
• Иммуномодуляторы (интерфероны, полиоксидоний).
• Физиотерапия (УВЧ, электрофорез, ультразвук).

Хирургическое лечение

• Показано при абсцессах печени, селезёнки, спондилитах с нестабильностью позвоночника, эндокардите.

Профилактика

Ветеринарно-санитарные мероприятия

• Выявление и выбраковка больных животных (реакция агглютинации, РИД, ПЦР).
• Вакцинация мелкого рогатого скота живой вакциной из штамма B. melitensis Rev.1 (в неблагополучных хозяйствах).
• Соблюдение санитарных правил при забое, переработке мяса, молока.
• Пастеризация и кипячение молока.

Медицинская профилактика

• Вакцинация людей живой бруцеллёзной вакциной (штамм B. abortus 19-BA) проводится по эпидемическим показаниям (группы риска). Вакцинация не даёт 100 % защиты.
• Соблюдение правил личной гигиены при работе с животными (перчатки, маски, очки).
• Диспансерное наблюдение за переболевшими (не менее 2 лет).

Меры в очаге

• Изоляция больных животных.
• Карантинные мероприятия в неблагополучных населённых пунктах.
• Экстренная профилактика доксициклином (100 мг 2 раза в сутки в течение 14 дней) для лиц, контактировавших с больными животными.

Интересные факты

• Brucella melitensis является потенциальным агентом биологического оружия (класс B по классификации CDC). В 1950-е годы в США и СССР велись разработки бруцеллёзных боеприпасов.
• Бактерия сохраняет жизнеспособность в почве до 2–3 месяцев, в молоке — до 8 дней, в замороженном мясе — до 6 месяцев.
• Бруцеллёз, вызванный B. melitensis, у коз может протекать бессимптомно, что затрудняет выявление источника инфекции.
• В 2010 году в Китае был зафиксирован случай массового заражения людей B. melitensis при употреблении сырого молока от инфицированных коз — пострадало более 500 человек.

Источники

1. Ветеринарная микробиология и иммунология / Под ред. Н. М. Колычева. — М.: КолосС, 2003.
2. Бруцеллёз: клиника, диагностика, лечение / В. И. Покровский, Т. К. Черкасова. — М.: Медицина, 2005.
3. Медицинская микробиология / Под ред. А. А. Воробьёва. — М.: МИА, 2006.
4. Санитарные правила СП 3.1.7.2612-10 «Профилактика бруцеллёза» (утв. постановлением Главного государственного санитарного врача РФ от 26.04.2010 № 37).
5. Brucella melitensis: pathogenesis, epidemiology and control / M. N. Xavier, T. A. Paixão, A. P. Lage et al. // Veterinary Microbiology. — 2010. — Vol. 140, № 3–4. — P. 346–355.
6. ПЦР-диагностика бруцеллёза: методические рекомендации / ФГУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора. — М., 2012.