Фенотипирование крови¶

Фенотипирование крови — это лабораторное определение антигенов (агглютиногенов) эритроцитов и белков сыворотки крови, входящих в групповые системы крови человека. Процедура позволяет установить не только группу по системе AB0 и резус-фактору, но и ряд дополнительных антигенных маркеров, что важно для переливания крови, судебно-медицинской идентификации личности, установления отцовства и медицинской генетики.

¶Основные системы крови

Кровь человека характеризуется наличием множества антигенных систем. К основным относят:

Всего в настоящее время известно более 40 систем крови, объединяющих свыше 500 антигенов эритроцитов. Установление антигенного состава эритроцитов и сыворотки и есть суть фенотипирования.

¶Методы фенотипирования

¶Серологические методы

Классический подход основан на реакции агглютинации: на предметное стекло или в пробирку вносят эритроциты пациента и стандартные сыворотки, содержащие известные антитела. Если антиген присутствует на мембране эритроцита, происходит склеивание клеток (агглютинация). Метод прост, доступен и широко используется в клинической практике.

¶Генотипирование (молекулярно-генетические методы)

Современное фенотипирование всё чаще дополняют генотипированием — определением генов, кодирующих антигены, методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с последующим секвенированием. Этот подход позволяет:

• определять антигены, отсутствующие на поверхности эритроцитов (например, при слабых вариантах антигена D);
• работать с образцами, непригодными для серологического анализа (старые пятна крови, деградированные образцы);
• устанавливать генотип плода по образцу материнской крови (неинвазивный пренатальный тест).

¶Масс-спектрометрия

В ряде лабораторий применяют масс-спектрометрию с ионизацией от матрицы, позволяющую одновременно определять множество антигенов по массе их белковых молекул. Метод высокопроизводителен, но требует дорогостоящего оборудования.

¶Применение

¶Переливание крови

Фенотипирование необходимо пациентам, которым требуется многократное переливание (гематологические больные, пациенты с талассемией, серповидноклеточной анемией). Повторное введение донорских эритроцитов с незнакомыми антигенами может вызвать иммунный ответ — образование аллоантител, что приводит к гемолитическим реакциям и затрудняет подбор совместимой крови. Фенотипирование позволяет заранее подобрать доноров с антигенным составом, совместимым с реципиентом.

¶Судебно-медицинская идентификация

Антигенный состав крови индивидуален и наследуется по законам Менделя. Комбинация антигенов нескольких систем существенно повышает вероятность однозначной идентификации личности. В России фенотипирование применяется в судебно-медицинской экспертизе при идентификации останков, расследовании преступлений, установлении отцовства и материнства.

¶Установление отцовства

Антигены крови наследуются от родителей, поэтому сочетание фенотипов матери, ребёнка и предполагаемого отца позволяет исключить или подтвердить биологическое отцовство. Методика основана на статистическом расчёте вероятности совпадения антигенов у случайных людей.

¶Медицинская генетика

Фенотипирование крови используется при диагностике наследственных заболеваний, связанных с дефектами белков мембраны эритроцитов (например, дефицит гликофорина при синдроме Маклеода, нарушения структуры спектрина при наследственных сфероцитозах).

¶Фенотипирование в России

В Российской Федерации фенотипирование крови проводится в центрах переливания крови, судебно-медицинских бюро и частных лабораториях. Стандартный набор определяемых антигенов для клинических целей включает системы AB0, резус (D, C, c, E, e), Келл, Кидд, Даффи и Манн. Регулирование деятельности по переливанию крови осуществляется приказами Министерства здравоохранения РФ и клиническими рекомендациями профессиональных сообществ.

¶Ограничения метода

Фенотипирование имеет ряд ограничений:

• серологические методы не всегда различают слабые и варианты антигенов (например, D-варианты);
• при наличии в крови пациента аллоантител или при переливании донорских эритроцитов серологическая реакция может давать ложные результаты;
• генетические методы дороже и требуют специализированного оборудования;
• интерпретация результатов требует квалификации специалиста.

Источники:

• Клинические рекомендации «Переливание крови и её компонентов» (Министерство здравоохранения РФ)
• Руководство по переливанию крови (ВОЗ)
• Практическое руководство по иммуногематологии / под ред. В. С. Козлова
• Справочник по трансфузиологии / Н. В. Козлов, А. А. Кулаков