ИГХ-исследование в онкологии¶
ИГХ-исследование (иммуногистохимическое исследование) — лабораторный метод диагностики, применяемый в патоморфологии и онкологии для выявления特定ных белков (антигенов) в ткани опухоли с помощью специфических антител. Метод позволяет уточнить тип опухоли, её происхождение, агрессивность и определить мишени для таргетной терапии, что напрямую влияет на выбор лечения.
¶Принцип метода
Иммуногистохимия основана на реакции антиген—антитело. На тонкие срезы ткани (обычно толщиной 3–5 мкм) последовательно наносят:
- Первичные антитела, специфичные к определённому антигену (белку) опухолевых клеток.
- Вторичные антитела, связывающиеся с первичными и помеченные ферментом (чаще щелочной фосфатазой или пероксидазой) или флуоресцентной меткой.
- Систему визуализации — хромоген, который при взаимодействии с ферментом образует окрашивание (обычно коричневое или красное), видимое под световым микроскопом.
Наличие окрашивания в ядре, цитоплазме или на мембране клетки указывает на присутствие исследуемого белка. Интенсивность и распределение сигнала оценивают визуально или с помощью количественных систем.
¶Роль в онкологической диагностике
В онкологии ИГХ применяется на нескольких этапах:
- Уточнение гистологического типа опухоли. Морфологически схожие опухоли могут иметь разное происхождение и требовать разных схем лечения. Например, карцинома неизвестного первичного очага требует определения тканевой принадлежности.
- Определение первичного очага при метастазах. Комбинация маркеров позволяет установить, из какого органа произошла опухоль.
- Оценка прогноза. Выраженность некоторых белков связана с агрессивностью течения.
- Подбор таргетной терапии. Наличие или отсутствие определённых молекул-мишеней определяет, будет ли лечение эффективным.
¶Основные маркеры
| Маркер | Что выявляет | Клиническое значение |
|---|---|---|
| Ki-67 | Пролиферативную активность | Индекс Ki-67 отражает скорость деления клеток; используется, например, при раке молочной железы |
| HER2 | Белок HER2/neu | Определяет показанность терапии трастузумабом и другими анти-HER2 препаратами |
| ER и PR | Рецепторы эстрогена и прогестерона | Указывают на гормонозависимость опухоли молочной железы |
| PD-L1 | Лиганд PD-1 | Высокая экспрессия связана с эффективностью ингибиторов иммунных контрольных точек |
| p53 | Мутантный белок p53 | Свидетельствует о нарушении гена-супрессора опухоли |
| CD-маркеры (CD20, CD3, CD30 и др.) | Принадлежность клеток к лимфоидным линиям | Используются в диагностике лимфом |
| TTF-1, Napsin A | Лёгочное происхождение | Помогают подтвердить первичный рак лёгкого |
| GATA3, mammaglobin | Молочную железу | Применяются при поиске первичного очага |
¶Проведение исследования
Материалом служит биоптат, операционный препарат или аутопсийный материал. Свежезамороженные срезы фиксируют формалином и заливают в парафиновые блоки (FFPE — formalin-fixed paraffin-embedded). Перед окрашиванием проводят антигенную ремобилизацию — нагревание среза в специальном буфере, восстанавливающем структуру белков, повреждённую формалиновой фиксацией.
Важным элементом является контроль качества: положительный и отрицательный контроль одновременно с исследуемым срезом. Результаты интерпретирует врач-морфолог (патологоанатом), оценивая не только наличие сигнала, но и его локализацию, процент окрашенных клеток и интенсивность.
¶Автоматизация и количественные системы
С середины 2000-х годов в клиническую практику внедрены автоматические иммунохимические платформы (Ventana, Dako/Agilent), обеспечивающие воспроизводимость окрашивания. Для количественной оценки используются системы компьютерной морфометрии — например, HercepTest и PATHWAY для HER2, VENTANA SP142 для PD-L1, а также алгоритмы на основе искусственного интеллекта, анализирующие изображения срезов.
¶Ограничения
ИГХ обладает рядом ограничений:
- Субъективность интерпретации при визуальной оценке, особенно для PD-L1 и Ki-67.
- Качество материала — некорректная фиксация или длительное хранение блоков снижают достоверность.
- Гетерогенность опухоли — разные участки новообразования могут иметь разный профиль экспрессии.
- Стоимость и доступность — не все маркеры доступны в малых лабораториях.
¶Развитие метода
Иммуногистохимия возникла в 1940-х годах как флуоресцентный метод (immunofluorescence), а в 1970-х получила распространение окрашивание с использованием ферментных меток. В России ИГХ-диагностика развивается ведущими онкологическими центрами — НМИЦ онкологии им. Н. Н. Петрова, ФГБУ «НМИЦ радиологии» Минздрава России и региональными патологоанатомическими отделениями. Стандарты проведения и интерпретации ИГХ закреплены в клинических рекомендациях Минздрава РФ и международных guidelines (ASCO/CAP для HER2, ESMO для PD-L1).
Источники:
- Клинические рекомендации Минздрава России по диагностике и лечению злокачественных новообразований
- WHO Classification of Tumours Editorial Board. Tumours of the Breast / Lung / Digestive System
- ASCO/CAP Guideline Update for HER2 Testing in Breast Cancer
- Hammond M.E.H. et al. ASCO/CAP Guideline for PD-L1 Testing
- Лиллевали П. Руководство по патологии опухолей человека