Иммуногистохимическое исследование опухолей¶
Иммуногистохимическое исследование (ИГХ, иммуногистохимия) — лабораторный метод диагностики, основанный на специфическом взаимодействии антител с антигенами тканевых структур. Метод применяется преимущественно в онкологической патологии для определения гистологического типа опухоли, её агрессивности, прогноза и подбора таргетной терапии. ИГХ проводится на парафиновых блоках ткани, полученных при биопсии или хирургическом удалении опухоли.
¶Принцип метода
В основе ИГХ лежит реакция антиген–антитело. На срез ткани наносятся моноклональные или поликлональные антитела, специфичные к определённым белкам (антигенам). Если антиген присутствует в ткани, антитело связывается с ним. Для визуализации используется вторичная система с ферментом (обычно пероксидазой хрена или щелочной фосфатазой), которая при добавлении хромогена образует окрашивание в месте связывания. Результат оценивается патогистологом под микроскопом: наличие, интенсивность и распределение окрашивания интерпретируются как положительный или отрицательный результат.
Перед окрашиванием проводится антигенная ремобилизация (энзиматическая или термическая), поскольку формалинфиксация и заливка в парафин частично маскируют антигены.
¶Основные маркеры в онкологии
В онкологической практике используется несколько групп маркеров.
¶Маркеры дифференциации опухоли
Позволяют определить тканевое происхождение опухоли при неясной морфологии:
| Маркер | Типичная локализация опухоли |
|---|---|
| Цитокератины (AE1/AE3) | Карциномы (эпителиальные опухоли) |
| S100, SOX10 | Меланома, шваннома |
| CD45 | Лимфомы |
| Desmin, миоглобин | Саркомы мышечного происхождения |
| GATA3 | Рак молочной железы, мочевого пузыря |
| TTF-1 | Рак лёгкого, щитовидной железы |
| PAX8 | Рак яичника, почки, щитовидной железы |
| CDX2 | Рак толстой кишки |
¶Маркеры прогноза и подбора терапии
- HER2 (ERBB2) — определение амплификации или перепроизводства белка HER2 при раке молочной железы и раке желудка. Положительный результат является основанием для назначения таргетных препаратов (трастузумаб и аналоги).
- ER и PR — рецепторы эстрогена и прогестерона. Их наличие определяет гормонозависимость опухоли молочной железы и возможность гормональной терапии (тамоксифен, ингибиторы ароматазы).
- Ki-67 — маркер пролиферативной активности. Высокий индекс Ki-67 (обычно >30 %) указывает на агрессивный рост и используется при расчёте пролиферативного индекса в системах оценки (например, в генетических тестах).
- p53 — мутации гена TP53 выявляются как аберрантные паттерны окрашивания (полная утрата или диффузное ядерное окрашивание).
- MSH2, MLH1, MSH6, PMS2 — белки системы репарации неспаренных оснований (MMR). Утрата их экспрессии указывает на микросателлитную нестабильность (MSI-H) и определяет возможность иммунотерапии ингибиторами контрольных точек (пембролизумаб).
- PD-L1 — оценка экспрессии лиганда PD-1 для определения показаний к иммунотерапии при раке лёгкого, мочевого пузыря, головы и шеи и других локализаций. Результат выражается в виде TPS или CPS.
¶Показания к назначению
ИГХ назначается в следующих ситуациях:
- Морфологически неясная опухоль, при которой требуется уточнение гистогенеза.
- Метастатическая опухоль с неизвестным первичным очагом.
- Необходимость определения молекулярного подтипа (например, при раке молочной железы — люминальный A/B, HER2-позитивный, трижды негативный).
- Подбор таргетной или иммунотерапии.
- Оценка прогноза и риска рецидива.
¶Техника выполнения
Материалом служит ткань, фиксированная в 10 % нейтральном формалине и заливённая в парафин. Готовятся срезы толщиной 3–5 мкм. Окрашивание выполняется вручную или на автоматических системах (Ventana, Dako) — автоматизация обеспечивает воспроизводимость результатов. Каждая серия сопровождается контролями: положительным (ткань с известной экспрессией) и отрицательным (замена первичного антитела на неиммунную сыворотку).
¶Ограничения
ИГХ не является генетическим исследованием: метод оценивает белок, а не ДНК. При необходимости выявления мутаций (например, EGFR, BRAF, KRAS) требуется молекулярно-генетический анализ. Ложноположительные и ложноотрицательные результаты возможны при неправильной фиксации материала. Некоторые маркеры неспецифичны и требуют интерпретации в панели, а не изолированно.
¶ИГХ в России
В российских онкологических центрах ИГХ является стандартом первичной диагностики злокачественных опухолей. Отечественные реагенты для ИГХ производятся рядом компаний, однако значительная часть антител импортируется. Методика включена в клинические рекомендации Минздрава РФ по диагностике рака молочной железы, лёгкого, толстой кишки и других локализаций.
Источники: клинические рекомендации Минздрава России по онкологическим заболеваниям; ВОЗ классификация опухолей мягких тканей и органов пищеварения; учебник «Патологическая анатомия» (под ред. А. И. Струкова, В. В. Серова); журнал «Вопросы онкологии».