ИФА крови — что это и зачем проводят¶

ИФА крови (иммуноферментный анализ) — лабораторный метод исследования биологического материала, основанный на специфическом взаимодействии антигена и антитела и последующей регистрации сигнала с помощью фермента-метки. Метод относится к классу иммунохимических анализов и применяется для качественного и количественного определения широкого спектра веществ в сыворотке крови, моче, слюне и других жидкостях организма. ИФА является одним из наиболее распространённых лабораторных методов в клинической диагностике, серологии и научных исследованиях.

¶Принцип метода

В основе ИФА лежит реакция антиген — антитело. Антитела (или антигены) сорбируют на твёрдой фазе — чаще всего на поверхности лунок полистиролового планшета. В лунку вносят исследуемый образец: если в нём присутствует искомое вещество (аналит), оно связывается с закреплённым компонентом системы. Избыток несвязавшихся компонентов удаляют промыванием.

Затем вносят конъюгат — антитела (или антиген), связанный с ферментом-меткой. Наиболее часто используются ферменты:

• пероксидаза хрена (HRP) — с субстратом ТМБ или ОФФ;
• щелочная фосфатаза (AP) — с субстратом pNPP;
• β-галактозидаза.

После инкубации и повторного промывания добавляют субстрат, который фермент превращает в окрашенный продукт. Интенсивность окраски, измеряемая спектрофотометром при определённой длине волны, пропорциональна количеству связанного аналита. Результат выражают в единицах измерения, зависящих от типа тест-системы (МЕ/мл, Ед/мл, нг/мл, индекс позитивности).

¶Виды ИФА

По типу используемых реагентов и схеме построения различают несколько форматов:

¶Что можно определить методом ИФА

Диапазон применения ИФА чрезвычайно широк. Основные группы анализов:

• Инфекции: антитела классов IgM, IgG, IgA к возбудителям (ВИЧ, гепатиты A, B, C, герпес, цитомегаловирус, краснуха, токсоплазмоз, хеликобактер, сифилис, коронавирусы и другие).
• Гормоны: ТТГ, Т3, Т4, пролактин, кортизол, инсулин, прогестерон, эстрадиол, тестостерон, ХГЧ, гормоны гипофиза.
• Онкомаркеры: ПСА (общий и свободный), СА-125, СА-19-9, РЭА, АФП, ХГЧ, НЕ4.
• Аллергология: специфические IgE к пищевым и ингаляционным аллергенам.
• Аутоиммунные заболевания: антитела к тиреопероксидазе, тиреоглобулину, рецепторам ТТГ, антинуклеарные антитела, антитела к цитруллинированному белку.
• Маркеры инфекционного иммунитета: антитела к вирусным гепатитам, ветряной оспе, COVID-19.

¶Показания к назначению

ИФА крови назначают при подозрении на инфекционное заболевание (в том числе на ранних сроках, когда ПЦР может быть отрицательной), при скрининге беременных, при обследовании по поводу бесплодия, эндокринных нарушений, подозрения на онкологический процесс, при динамическом наблюдении за пациентом (контроль уровня гормонов, маркеров). Метод применяют для оценки вакцинального иммунитета и при проведении донорского скрининга.

¶Подготовка и забор материала

Кровь для ИФА берут из вены, обычно утром натощак (8–12 часов голода). Перед сдачей рекомендуется исключить физические и эмоциональные нагрузки, алкоголь. Для ряда тестов (гормоны щитовидной железы, инсулин, липидный профиль) требуется специальная подготовка. Результаты обычно готовы через 1–3 рабочих дня.

¶Достоинства и ограничения

К преимуществам ИФА относят высокую чувствительность и специфичность, возможность автоматизации, относительно невысокую стоимость, пригодность для массового скрининга и количественной оценки. Ограничения связаны с возможностью ложноотрицательных результатов в ранний период инфекции (до появления антител), перекрёстными реакциями, влиянием сопутствующих заболеваний и приёмом некоторых лекарственных средств. Положительный результат ИФА при подозрении на инфекцию, как правило, требует подтверждения более специфичными методами — ПЦР, иммуноблоттингом.

¶История

Иммуноферментный анализ был предложен в 1971 году независимо друг от друга шведским учёным Ингмаром Энгвалем и венгерским биохимиком Палом Киршем. Метод быстро вытеснил радиоиммунный анализ, поскольку не требовал работы с радиоактивными изотопами. В СССР и России ИФА стал внедряться в клиническую практику с начала 1980-х годов и с тех пор остаётся базовым методом лабораторной диагностики.

Источники:

• Клинические лабораторные исследования: национальное руководство / под ред. А. И. Карпова, В. Н. Серова. — М.: ГЭОТАР-Медиа.
• Лабораторная диагностика инфекционных болезней: руководство / под ред. В. Д. Сорокина. — М.
• Ерохин В. В., Гурьев Т. О. Лабораторная диагностика: учебное пособие.
• Материалы Всемирной организации здравоохранения по лабораторной диагностике.