Т-спот — тест на туберкулёз¶
Т-спот (T-SPOT.TB) — иммунологический тест in vitro для диагностики латентной и активной формы туберкулёза, основанный на выявлении специфической Т-клеточной реакции на антигены возбудителя Mycobacterium tuberculosis. Тест относится к группе интерферон-gamma release assays (IGRA) — методов, определяющих высвобождение интерферона гамма (IFN-γ) сенсибилизированными T-лимфоцитами при их стимуляции туберкулёзными антигенами.
¶Принцип метода
При инфицировании M. tuberculosis в организме формируется иммунологическая память: антиген-специфичные T-клетки (преимущественно CD4+ и CD8+) запоминают возбудителя и при повторной встрече с его антигенами выделяют интерферон гамма. Т-спот фиксирует именно эту реакцию.
В ходе теста периферическую венозную кровь пациента разделяют на мононуклеарную фракцию (PBMC) и инкубируют с двумя синтетическими пептидами ESAT-6 и CFP-10 — продуктами генов esxA и esxB, закодированных в области генома бактерии RD1. Эта область отсутствует у вакцинного штамма БЦЖ и у большинства нетуберкулёзных микобактерий, что обеспечивает высокую специфичность теста.
Параллельно ставят контрольные пробы: негативный (без стимуляции) и позитивный (со стимулятором митогеном). Результат оценивают по количеству «спот-клеток» — лимфоцитов, продуцирующих IFN-γ, которые визуализируются методом ELISpot (иммуноферментного анализа в твёрдой фазе с накоплением продукта).
¶Показания
Т-спот применяют в следующих случаях:
- обследование лиц, контактировавших с больными туберкулёзом;
- оценка риска реактивации латентной инфекции при назначении иммуносупрессивной терапии (глюкокортикоиды, анти-TNF-препараты, цитостатики);
- дифференциальная диагностика при подозрении на внелегочные формы туберкулёза;
- обследование медицинского персонала и работников учреждений повышенного риска;
- оценка вакцинированных лиц — в отличие от реакции Манту, результат не зависит от прививки БЦЖ.
В России тест включён в клинические рекомендации Российского туберкулёзологического общества и используется как дополнение к туберкулиновым пробам.
¶Подготовка и проведение
Специальная подготовка не требуется. Кровь из вены забирают в пробирку с антикоагулянтом (гепарин). Пробу необходимо доставить в лабораторию и обработать не позднее 16 часов после забора (при комнатной температуре) — в противном случае результат считается недостоверным. Само лабораторное исследование занимает около 24 часов.
¶Результаты
Результат выражается в количестве spot-forming units (SFU) на 250 000 клеток. Согласно инструкции производителя (Oxford Immunotec), интерпретация проводится по следующим критериям:
| Показатель | Значение |
|---|---|
| Негативный контроль | ≤ 10 SFU |
| Разница (антигены − негативный контроль) | < 6 SFU — отрицательный результат |
| Разница (антигены − негативный контроль) | ≥ 6 SFU — положительный результат |
| Митоген-контроль | < 20 SFU при отрицательном результате антигенов — результат недостоверен |
Положительный результат указывает на инфицированность M. tuberculosis (латентную или активную форму) и не может сам по себе различать эти состояния. Отрицательный результат с высокой вероятностью исключает инфицирование, однако у лиц с тяжёлым иммунодефицитом возможны ложноотрицательные результаты.
¶Преимущества и ограничения
К достоинствам Т-спот относят:
- высокую специфичность (95–98 %) — отсутствие перекрёстных реакций с БЦЖ и нетуберкулёзными микобактериями;
- объективность — количественный результат, не зависящий от субъективной оценки, как при чтении пробы Манту;
- однократный визит пациента (в отличие от двухэтапной пробы Пирке);
- возможность применения у детей раннего возраста.
Ограничения:
- стоимость теста существенно выше, чем у туберкулиновых проб;
- требуется лабораторное оборудование и свежий биоматериал;
- не различает латентную и активную форму инфекции;
- возможны ложноотрицательные результаты при ВИЧ-инфекции, лимфопениях, терапии иммуносупрессорами.
¶Т-спот и другие тесты на туберкулёз
В России параллельно с IGRA применяются кожные туберкулиновые пробы — реакция Манту и диаскинтест. Основные различия приведены в таблице:
| Параметр | Т-спот | Реакция Манту | Диаскинтест |
|---|---|---|---|
| Тип реакции | ELISpot in vitro | Кожная гиперчувствительность | Кожная гиперчувствительность |
| Влияние БЦЖ | Отсутствует | Есть | Отсутствует |
| Специфичность | Высокая | Средняя | Высокая |
| Объективность | Количественная | Полуколичественная | Полуколичественная |
¶История
Тест T-SPOT.TB разработан британской компанией Oxford Immunotec на основе технологии ELISpot, предложенной в 1980-х годах. Коммерческий запуск состоялся в 2004 году. В России тест получил регистрацию и с 2010-х годов постепенно внедряется в практику противотуберкулёзной службы.
Источники:
- Инструкция по медицинскому применению тест-системы T-SPOT.TB (Oxford Immunotec)
- Клинические рекомендации Российского туберкулёзологического общества по диагностике и лечению туберкулёза
- Национальные клинические рекомендации «Туберкулёз у детей»
- Постановление Главного государственного санитарного врача РФ по вопросам профилактики туберкулёза