Квантифероновый тест

Квантифероновый тест (также известный как IGRA-тест, от англ. Interferon Gamma Release Assay) — это лабораторный метод диагностики туберкулёзной инфекции, основанный на определении высвобождения гамма-интерферона (IFN-γ) сенсибилизированными Т-лимфоцитами крови в ответ на стимуляцию специфическими антигенами Mycobacterium tuberculosis.

В отличие от туберкулиновой пробы (пробы Манту), квантифероновый тест является in vitro-диагностикой, то есть проводится не в организме пациента, а в пробирке с образцом крови. Это исключает влияние предшествующей вакцинации БЦЖ и большинства нетуберкулёзных микобактерий, что делает тест более специфичным.

История

Разработка IGRA-тестов стала возможной после расшифровки генома Mycobacterium tuberculosis в 1998 году. Учёные идентифицировали участки генома RD1 (Region of Difference 1), которые присутствуют у патогенных микобактерий туберкулёзного комплекса, но отсутствуют у вакцинного штамма БЦЖ и большинства нетуберкулёзных микобактерий. На основе этих участков были синтезированы рекомбинантные антигены ESAT-6 и CFP-10.

Первый коммерческий IGRA-тест — QuantiFERON-TB — был разработан австралийской компанией CSL Limited и одобрен Управлением по контролю за продуктами и лекарствами США (FDA) в 2001 году. В 2005 году на рынок вышла усовершенствованная версия QuantiFERON-TB Gold, а в 2011 году — QuantiFERON-TB Gold Plus (QFT-Plus), которая позволяет различать активную и латентную инфекцию с помощью двух антигенных стимулов.

В России квантифероновый тест применяется с 2010-х годов, но не входит в обязательный скрининг детского населения (в отличие от пробы Манту и Диаскинтеста). Он используется преимущественно в частных медицинских центрах и для обследования взрослых с противопоказаниями к туберкулиновым пробам.

Принцип метода

Метод основан на клеточном иммунном ответе. При контакте организма с Mycobacterium tuberculosis Т-лимфоциты памяти приобретают способность распознавать специфические антигены бактерии. При повторной стимуляции этими антигенами in vitro сенсибилизированные Т-клетки высвобождают гамма-интерферон.

Этапы проведения

1. Забор крови: венозная кровь помещается в пробирки с гепарином.
2. Инкубация: кровь смешивается с антигенами ESAT-6, CFP-10 и TB7.7 (в составе QFT-Plus) и инкубируется 16–24 часа при 37°C.
3. Центрифугирование: отделяется плазма.
4. Иммуноферментный анализ (ИФА): измеряется концентрация гамма-интерферона в плазме с помощью моноклональных антител.
5. Интерпретация: результат сравнивается с контрольными образцами (отрицательный контроль — кровь без антигенов, положительный контроль — кровь с митогеном).

Классификация IGRA-тестов

Существует два основных коммерческих IGRA-теста, одобренных Всемирной организацией здравоохранения (ВОЗ):

Оба теста имеют сопоставимую чувствительность (80–90%) и специфичность (95–99%) для диагностики туберкулёзной инфекции.

Показания к применению

Квантифероновый тест рекомендован в следующих случаях:

• Латентная туберкулёзная инфекция (ЛТИ): выявление инфицирования без клинических проявлений.
• Дифференциальная диагностика: при подозрении на туберкулёз, когда другие методы (рентген, микроскопия мазка) неинформативны.
• Обследование контактных лиц: после контакта с больным активной формой туберкулёза.
• Иммуносупрессия: у пациентов с ВИЧ-инфекцией, принимающих иммуносупрессивную терапию (например, после трансплантации), при лечении биологическими препаратами (ингибиторы ФНО-α).
• Противопоказания к туберкулиновым пробам: аллергические реакции на туберкулин, кожные заболевания, эпилепсия.
• Вакцинированные БЦЖ: в странах, где проводится массовая вакцинация, IGRA-тесты предпочтительнее, так как не дают ложноположительных результатов из-за вакцины.

Преимущества и недостатки

Преимущества

• Высокая специфичность: отсутствие перекрёстных реакций с вакциной БЦЖ и нетуберкулёзными микобактериями.
• Однократный визит: не требуется повторное посещение врача для оценки результата (как при пробе Манту через 72 часа).
• Объективность: результат не зависит от субъективной оценки (как при измерении папулы).
• Безопасность: нет риска бустер-эффекта (усиления реакции при повторных пробах).
• Пригодность для иммунокомпрометированных пациентов: не требует нормального функционирования кожной иммунной системы.

Недостатки

• Стоимость: тест значительно дороже туберкулиновой пробы (в России — от 3 000 до 6 000 рублей).
• Лабораторная инфраструктура: требуется оснащённая лаборатория, обученный персонал, соблюдение сроков доставки и инкубации (не более 8–12 часов после забора крови).
• Невозможность различить латентную и активную инфекцию: положительный результат не указывает на активность процесса (за исключением QFT-Plus с двумя антигенными стимулами).
• Ложноотрицательные результаты: возможны при глубокой иммуносупрессии (например, у ВИЧ-инфицированных с низким уровнем CD4+ лимфоцитов), у детей младшего возраста (до 2 лет) и при недавнем инфицировании (сероконверсия в течение 8–12 недель).
• Ложноположительные результаты: возможны при инфицировании M. kansasii, M. szulgai и M. marinum (редкие нетуберкулёзные микобактерии).

Интерпретация результатов

Результат квантиферонового теста выражается в международных единицах на миллилитр (МЕ/мл) или в виде качественного ответа:

• Положительный: уровень IFN-γ в антигенной пробирке превышает фоновый уровень (отрицательный контроль) на установленную пороговую величину (обычно ≥0,35 МЕ/мл для QFT-Plus). Указывает на инфицирование M. tuberculosis (латентное или активное).
• Отрицательный: уровень IFN-γ ниже порогового значения. С высокой вероятностью исключает туберкулёзную инфекцию.
• Неопределённый: низкий ответ на положительный контроль (митоген) или высокий фоновый уровень. Требует повторного тестирования или клинической оценки.

Применение в России

В Российской Федерации квантифероновый тест не входит в официальные клинические рекомендации по скринингу детского населения (приказ Минздрава РФ № 124н от 21 марта 2017 года). Для детей до 7 лет приоритетной остаётся проба Манту, для детей старше 7 лет — Диаскинтест (аллерген туберкулёзный рекомбинантный). IGRA-тесты используются:

• Для подтверждения диагноза при сомнительных результатах туберкулиновых проб.
• У взрослых с противопоказаниями к кожным тестам.
• В научных исследованиях и эпидемиологическом мониторинге.
• В частных медицинских центрах по желанию пациента.

ВОЗ рекомендует IGRA-тесты как альтернативу туберкулиновым пробам в странах с низкой распространённостью туберкулёза и для обследования определённых групп риска.

Источники

1. Министерство здравоохранения РФ. Клинические рекомендации «Туберкулёз у взрослых» (2020).
2. Всемирная организация здравоохранения. «Use of tuberculosis interferon-gamma release assays (IGRAs) in low- and middle-income countries» (2011).
3. Pai M., Denkinger C.M., Kik S.V. et al. «Gamma interferon release assays for detection of Mycobacterium tuberculosis infection» // Clinical Microbiology Reviews, 2014.
4. Diel R., Loddenkemper R., Nienhaus A. «Evidence-based comparison of commercial interferon-gamma release assays for detecting active TB: a metaanalysis» // Chest, 2010.
5. Инструкция по применению набора реагентов QuantiFERON-TB Gold Plus (Qiagen, 2016).